在生物化學(xué)中，透析是在大分子樣本溶液中通過選擇性和被動擴(kuò)散的原理分離小分子和不想要的化合物的過程。 通常來說，樣品和緩沖液溶液（透析液）放到膜的相反面上。因?yàn)橥肝鐾ㄟ^擴(kuò)散發(fā)生作用，分子會自然的從高濃度到低濃度區(qū)域進(jìn)行移動直到達(dá)到平衡點(diǎn)。從而協(xié)助樣品和透析液分子的分離。

  因?yàn)榇蠓肿硬荒芡ㄟ^膜孔徑，他們會在容器的樣品面得到保留。然而，我們不想要的分子 (包括鹽類緩沖液 (Tris 和PBS), 還原劑 (DTT, BME), 防腐劑比如硫汞撒以及非反應(yīng)的交聯(lián)劑或標(biāo)記試劑比如 sulfo-SMCC 和 生物素), 這些分子在尺寸上非常小，可以非常容易的擴(kuò)散出半透膜到透析液中。 這降低了樣品中目標(biāo)分子的濃度直到整個溶液達(dá)到了平衡。

  通常來講，透析的速率很慢因?yàn)樗咏胶夂竽阈枰淖兺肝鲆海瑤仔r后重新建立可以驅(qū)動透析的濃度差. 通過使透析進(jìn)行到平衡在改變透析液緩沖液之前，你能夠純化在透析膜上濃縮得到的物質(zhì)通過樣品體積和緩沖液體積之間的因子比例.

透析步驟

  由于涉及到每一個樣品的變量很多，所以透析的完成點(diǎn)是多少有些主管的判斷，沒有通用的透析步驟可以適用所有的應(yīng)用。記住，這里提供一個典型的透析步驟可以用于蛋白樣品。

1.預(yù)潤濕或制備透析膜根據(jù)廠家的指導(dǎo).

2.將樣品上到透析管或透析裝置中.

3.在室溫透析1-2小時.

4.改變透析緩沖液透析另外1-2個小時.

5.改變透析緩沖液4°C透析過夜.

   樣品和透析液組成的不同創(chuàng)造了一個跨膜的濃度差，這驅(qū)動了整個過程的發(fā)生。因?yàn)槿绱?，你?yīng)該使用一個高緩沖液對樣品的體積比來維持這個濃度梯度。為了得到結(jié)果，確保你的透析液是樣品體積的 200 到 500 倍. 透析液緩沖液改變的次數(shù)以及透析的時間都會影響你的結(jié)果。

提高透析的效果

通常來講，你可以提高實(shí)驗(yàn)的速率和效率通過控制影響擴(kuò)散的因子。

  ·加熱. 加熱影響分子的熱動力學(xué)這樣你可以加速擴(kuò)散和透析通過增加溫度。然而，請記住你的目標(biāo)蛋白分子的熱穩(wěn)定性是非常重要的和你的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行的速率相比。

  ·濃度. 擴(kuò)散的速率直接對應(yīng)于分子的濃度. 結(jié)果是，很大的可能性是分子會和透析膜接觸，通過另外一側(cè)在發(fā)生擴(kuò)散如果分子的濃度比較高。

  ·分子量. 擴(kuò)散的速率和分子的分子量是成反比的，因此分子量越大，移動的速率越慢，從而更小的機(jī)會通過膜發(fā)生擴(kuò)散。

  ·膜. 透析的速率直接相關(guān)于膜的表面積以及負(fù)相關(guān)膜的厚度。因此，選擇一個能夠提供一個表面積對體積比的膜。因?yàn)槟さ暮穸纫矔Q定透析的效率，使用一個大約 0.5 到 1.2 mil (12 到 30µm) 的厚度的膜來保證好的擴(kuò)散速率和結(jié)構(gòu)的完整性。

  ·攪拌. 攪拌的效率打破了能斯脫層外部的大環(huán)境從而幫助維持濃度差，推動擴(kuò)散過程完成.

  ·在透析液中加入化學(xué)反應(yīng)劑. 有一些反應(yīng)劑，當(dāng)加入到透析緩沖液中后，可以移動溶液的平衡。這可以幫助去除可能存在的更多的小分子從而使樣品更加的純凈.

  為了進(jìn)一步提高透析步驟的效率, 你應(yīng)該考慮使用透析裝置，這樣可以保證 100%恢復(fù) (即使沉淀發(fā)生) 來防止你的寶貴樣品的丟失. 除此之外，當(dāng)使用產(chǎn)品來增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的速率時, 考慮使用那些不包含任何有可能干擾或修飾你的試劑的化學(xué)品, 或者能夠通過透析膜的化學(xué)品。

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